న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ సింథసిస్ సూత్రాలు

న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ సంశ్లేషణ ఘన దశ సియాలిక్ అమైడ్ ట్రైగ్లిజరైడ్ పద్ధతిని ఉపయోగించి నిర్వహించబడుతుంది, దీని ద్వారా DNA యొక్క 3′ ముగింపు ఘన దశ ఉపరితలంపై స్థిరీకరించబడుతుంది మరియు కావలసిన DNA భాగం సంశ్లేషణ చేయబడే వరకు 3′ నుండి 5′ వరకు న్యూక్లియోటైడ్‌లు జోడించబడతాయి. .ఇది DNA పాలిమరేస్ యొక్క అప్లికేషన్ ద్వారా DNA సంశ్లేషణ నుండి భిన్నంగా ఉంటుంది.

మొదటి బేస్ యొక్క 3′ ముగింపు సంశ్లేషణ సమయంలో CPGపై స్థిరీకరించబడుతుంది, తదుపరి బేస్ యొక్క 5′-OH డి-పి-టోలిల్ ట్రైటైల్ DMTతో రక్షించబడుతుంది, బేస్‌పై ఉన్న అమైనో సమూహం బెంజోయిక్ ఆమ్లంతో మరియు 3′తో రక్షించబడుతుంది. -OH అమైనో ఫాస్ఫేట్ సమ్మేళనంతో సక్రియం చేయబడుతుంది.1 బేస్ యొక్క 5 5′-OH యొక్క 1 బేస్ మరియు తదుపరి బేస్ యొక్క 3′-OH ఒక ఫాస్ఫైట్ ట్రైగ్లిజరైడ్‌ను ఏర్పరుస్తుంది, ఇది అయోడిన్‌తో ఫాస్ఫేట్ ట్రైగ్లిజరైడ్‌గా ఆక్సీకరణం చెందుతుంది, రెండవ బేస్ 5′-OHపై ఉన్న ప్రొటెక్టెంట్ తొలగించబడుతుంది డైక్లోరోఅసిటిక్ యాసిడ్ DM సైకిల్స్‌ను తదుపరి బేస్ జోడించడం ద్వారా జోడించడం, మరియు సంశ్లేషణ తర్వాత 5′-OHపై ఉన్న ప్రొటెక్టెంట్ బలహీనమైన యాసిడ్‌తో తొలగించబడుతుంది, ఆ భాగం సాంద్రీకృత అమ్మోనియం హైడ్రాక్సైడ్‌తో ఘన రెసిన్ నుండి డిస్‌కనెక్ట్ చేయబడుతుంది, రక్షిత మూలాధారం నుండి తొలగించబడుతుంది. వేడి చేయడంలో సాంద్రీకృత అమ్మోనియం హైడ్రాక్సైడ్‌తో, అమ్మోనియం హైడ్రాక్సైడ్ తొలగించబడుతుంది, శకలం వాక్యూమ్ ఎండబెట్టబడుతుంది మరియు న్యూక్లియిక్ ఆమ్లం ద్రవ క్రోమాటోగ్రఫీ లేదా PAGE ద్వారా శుద్ధి చేయబడుతుంది.

ఒలిగో సంశ్లేషణ దశలు

డిబ్లాకింగ్

దిTCA సొల్యూషన్‌ని జోడించడం ద్వారా 5 ముగింపు DMT ప్రొటెక్టింగ్ గ్రూప్ తీసివేయబడుతుంది.

యాక్టివేషన్

యాక్టివేటర్‌ను ఒలిగోన్యూక్లియోటైడ్ మోనోమర్‌తో కలిపి క్రియాశీల ఒలిగోన్యూక్లియోటైడ్ మోనోమర్ ఇంటర్మీడియట్‌ను ఏర్పరుస్తుంది.

కలపడం

5-టెర్మినల్ హైడ్రాక్సిల్ సమూహం ఒక అస్థిర ఫాస్ఫైట్ ట్రైగ్లిజరైడ్ బంధాన్ని ఏర్పరచడానికి యాంటీ-జెనరేటివ్ కండెన్సేషన్ రియాక్షన్‌లో క్రియాశీల ఒలిగోన్యూక్లియోటైడ్ ఇంటర్మీడియట్‌తో చర్య జరుపుతుంది.

క్యాపింగ్ 

ఒక క్యాపింగ్ ఏజెంట్ యొక్క జోడింపు సంగ్రహణ చర్యలో పాల్గొనని అదనపు హైడ్రాక్సిల్ సమూహాలతో ఎసిటైలేషన్ క్యాపింగ్ రియాక్షన్‌ని నిర్వహిస్తుంది.

ఆక్సీకరణం 

నీటిని కలిగి ఉన్న అయోడిన్ ద్రావణం యొక్క జోడింపు ఆక్సీకరణ ద్వారా అస్థిర ఫాస్ఫైట్ బంధాలతో చర్య జరిపి స్థిరమైన ఫాస్పోరిక్ యాసిడ్ ట్రైగ్లిజరైడ్ బంధాలను ఏర్పరుస్తుంది.

సైనోఇథైల్ క్లీవేజ్

సంశ్లేషణ తర్వాత న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ ఉత్పత్తి, ఫాస్ఫేట్ ట్రైగ్లిజరైడ్ బంధం నుండి సైనోఇథైల్ సమూహాన్ని తొలగించడానికి DEA ద్రావణాన్ని జోడించడం.

క్లీవ్డ్ & డిప్రొటెక్షన్

న్యూక్లియిక్ యాసిడ్ శకలాలు సాంద్రీకృత అమ్మోనియం హైడ్రాక్సైడ్ ద్రావణాన్ని జోడించడం ద్వారా ఘన దశ క్యారియర్ నుండి విడదీయబడతాయి మరియు బేస్‌ల హైడ్రోజన్ బంధాల నుండి రక్షించే సమూహాలను తొలగించడానికి వేడి చేయబడతాయి.